Приготовление фосфатного буфера

[admin]

Во многих прописях используются "забуференные" растворы, например 10% нейтральный формалин, ЗФР - забуференный физиологический раствор и др.

Наиболее доступным и простым в приготовлении является фосфатный буфер, пропись которого цитируется по Kuo J. Electron Microscopy (Methods and Protocols) / 2-nd ed., Ed. by John Kuo // in Methods In Molecular Biology. - Humana Press, Totowa NJ. - 2008. - 608p. (есть в электронном виде на нашем сайте в разделе книги).

Preparation of Sorenson’s 0.2 M Phosphate Buffer
Solution A: monobasic sodium phosphate
(2.76 g of NaH2PO4•H2O or 3.12 g of NaH2PO4• 2H2O in 100 mL of distilled water).
Solution B: dibasic sodium phosphate
(2.84 g of Na2HPO4 or 5.36 g of Na2HPO4•7H2O or 7.17 g of Na2HPO4•12H2O in 100 mL of distilled water).
pH • A, mL • B, mL
6.8 • 51.0 • 49.0
7.0 • 39.0 • 61.0
7.2 • 28.0 • 72.0
7.4 • 19.0 • 81.0

При этом требуемое значение pH буфера, под контролем иономера, можно достичь добавлением дополнительного количества расствора A (уменьшение pH) или расствора B (увеличение pH). Под сомнением остается лишь молярность расствора, т.к. этот буфер в другом месте книги цитируется как "0,1 М буффер".

Просьба знающих людей расчитать молярность прописи и указать, как она меняется при изменении пропорции расстворов.

[Vladimir]

Молярность прописи - 0,2М при любой пропорции растворов А и B.

Готовятся растворы A и B, затем они смешиваются в нужных пропорциях и получаются 0,2М буферные растворы с необходимыми значениями pH. Перед выполнением работы выбирается ранее приготовленный 0,2М буферный раствор и разбавляется дистиллированной водой в соотношении 1:1. При этом молярность раствора понижается до 0,1М, а pH практически не изменяется. Для работы используется 0,1М раствор.

"The buffers are used at a final, working dilution of 0.1 M."
(стр.3, раздел "2.2. Buffers", последнее предложение первого абзаца)