Окрашивание по Пачини

[admin]

Методики окрашивания соединительной ткани.
Цитируется по: Ромейс Б. Микроскопическая техника / Б. Ромейс; [пер. с немец. В.Александрова]. – М.: Издательство иностранной литературы, 1953. – 718 с. (с.357-358)

МЕТОД ОКРАСКИ ПАЧИНИ И ЕГО МОДИФИКАЦИИ
1499. Оригинальный метод Пачини (1905). Метод дает резкие контрасты в окраске между соединительной тканью и остальными тканевыми структурами. Как и метод Унна с водным голубым и орсеином (см. 1290), метод Пачини дает хорошие результаты в тех случаях, когда нужно отличить эпителиальный сетчатый остов от мезенхимного. Фиксация спиртом, формалином, сулемой, по Ценкеру, Гелли, Максимову, Штиве и т.д. Заливка в парафин или целлоидин.
Окраска:
а) срезы из воды переносят на 10 мин. в 2-процентный раствор фосфорновольфрамовой кислоты;
б) быстро споласкивают дестиллированной водой;
в) окрашивают 15—20 мин. в следующей смеси: водного голубого с орсеином (см. 1500) 10 капель, 2-процентного раствора эозина в 50-градусном спирте 12 капель, насыщенного водного раствора кислотного фуксина 1 капля и нейтрального глицерина 5 капель;
г) помещеют в дестиллированную воду;
д) дифференцируют в абсолютном спирте;
е) погружают в 2-процентную фосфорновольфрамовую кислоту (несколько секунд);
ж) абсолютный спирт; ксилол; бальзам.
Результат: коллагеновая соединительная ткань резко синяя; цитоплазма светлосиняя; ядра, эпителиальные волокна и кератогиалин красные; кератин желто-красный.
Я определил объемы капель и нашел для приведенных выше количеств следующие величины: водный голубой—орсеин 0,3 см³; эозин 0,3 см³; кислотный фуксин 0,04 см³; глицерин 0,25 см³. Для приготовления смеси я соединяю 100-кратные количества: 30, 30, 4 и 25 см³.

1500. Приготовление водного голубого—орсеина по Унна.
Раствор а: 1 г водного голубого в 100 см3 дестиллированной воды.
Раствор б: 1 г орсеина в 50 см3 абсолютного спирта; к этому прибавляют 5 см3 ледяной уксусной кислоты и 20 см3 глицерина; затем растворы а и б смешивают.

1501. Имеется еще второй раствор водного голубого—орсеина по Унна, содержащий эозин (см. 1290), который, однако, непригоден для метода Пачини.

1502. Модификация метода Пачини по Вальтеру (1929). Этот метод дает очень резко выраженное отличие коллагеновой соединительной ткани от цитоплазмы. По сравнению с методом Массона его недостаток состоит в том, что получается малый контраст между ядром и цитоплазмой, так как оба они окрашиваются в красный цвет. Фиксировать лучше всего в жидкостях, содержащих сулему (например, по Ценкеру, Гелли, Максимову, Штиве, Гейденгайну) или по Карнуа. Заливка в парафин. Толщина срезов лучше всего не более 5мкм.
Окраска:
а) срезы, освобожденные от парафина обычным путем, из дестиллированной воды помещают в 2,5-процентный раствор железных квасцов; срезы толщиной 2—4 мкм — на 24 часа, для более толстых достаточно 1—2 часа;
б) споласкивают в дважды сменяемой дестиллированной воде;
в) помещают в красящую смесь Пачини; срезы толщиной 2—4 мкм на 24 часа, более толстые от 5 мин. до 1 часа;
г) промывают в обыкновенной воде.
Дифференцируют в 96-градусном спирте до прекращения отдачи облачков краски. Абсолютный спирт; ксилол; бальзам.
Результат: коллагеновые волокна интенсивно синие, цитоплазма до тончайших ее отростков интенсивно карминово-красная. Секреторные зерна, в зависимости от их природы, синие, фиолетовые, красные, желтые или зеленые. Слизь яркого азурово-синего цвета. Приготовление красящей смеси Пачини см. 1499.

1503. По второй модификации Вальтера (1930) смешивают 2 части красящей смеси с 1 частью 2-процентного раствора железных квасцов. Через 24 часа смесь фильтруют. Срезы из дестиллированной воды поступают сразу в красящий раствор, без предварительной протравы, срезы толщиной 5—7 мкм — на 5—10 мин., более тонкие - сроком до 24 час. По моему опыту, следует предпочесть применение растворов в отдельности, по 1502.

1504. Окраска азокармином и по Пачини. Когаши (1937) на целлоидиновых срезах комбинирует окраску азокармином с окраской по Пачини. По сравнению с окраской азаном преимущество этого метода состоит в том, что целлоидин остается бесцветным.
Окраска: от а) до г) проводят, как в 1489; д) 5-процентная фосфорновольфрамовая кислота, 30—60 мин.; е) ополаскивание дестиллированной водой; ж) окраска в растворе Пачини, продолжительность варьирует в зависимости от препарата; з) дифференцировка в 95-градусном спирте; и) карбол-ксилол 30 сек.; ксилол; бальзам.

[admin]

1. Срезы из воды перенести в 2% раствор фосфорно-вольфрамовой кислоты (ФВК) на 10 мин.
2. Промыть дист. водой.
3. Окрашивание в смеси 15-20 мин (6 мкм - 1 ч).
4. Поместить в дист. воду.
5. Дифференцировать в абсолютном спирте (6 мкм - 10 мин. и более).
6. На несколько секунд поместить в 2% раствор ФВК
7. Абсолютный спирт, ксилол, бальзам.
Растворы:
1. 1 г ФВК растворить в 50 мл воды.
2. 100 мг водного голубого растворить в 10 мл воды.
3. 100 мг орсеина растворить в 5 мл абсолютного спирта + 0,5 мл СН3СООН + 2 мл глицерина.
4. 300 мг эозина спирторастворимого растворить в 15 мл 50° спирта
5. 2 мл насыщенного водного раствора кислого фуксина.
6. 12 мл глицерина.
!!! 2,3,4,5,6 - краситель: смешать эти растворы.
Прмечание:
1. Эозин вначале растворить в абс. спирте.
2. Срезы 6 мкм в красителе держать до 1 ч, дифференцировать до 10 мин.