Страница 1 из 1

Множественная окраска по Ван-Гизон и Ганзену

СообщениеДобавлено: 23 фев 2010, 17:30
admin
Множественная окраска для обзорных препаратов
Источник: Ромейс Б. Микроскопическая техника / Б. Ромейс; [пер. с немец. В.Александрова]. – М.: Издательство иностранной литературы, 1953. – 718 с. (с.168-170).

706. Ниже сведены методы, которые наряду со специальными целями служат и для окраски обзорных препаратов. О множественной окраске гемалаун—эозином и т.п. см.659.
707. Наряду с обычной окраской гемалаун—эозином излюбленной окраской для обзорных препаратов является тройная окраска гематоксилином— пикриновой кислотой — кислотным фуксином, впервые предложенная Ван-Гизоном.
Результат: ядра черно-коричневые; соединительная ткань ярко-красная; мускулатура интенсивно желтая; амилоид, коллоид, гиалин, муцин и т.п. окрашены в различные оттенки. Недостаток метода состоит в том, что окраска не очень устойчива. Так как количественные указания в оригинальной работе Ван-Гизона не точны, то это сразу привело к многочисленным модификациям метода.
Из них я особенно могу рекомендовать метод Ганзена. При точном следовании прописи он надежен в работе и дает очень ясную, чистую окраску. Сам по себе он может быть применен после любой гематоксилиновой окраски; но лучше всего им пользоваться в сочетании с железным триоксигематеином по Ганзену (см. 681) или с железным гематоксилином по Вейгерту (см. 677), так как при этом получается окраска ядер более стойкая, чем в случае квасцово-гематеиновых смесей. При употреблении последних нужно учитывать, что пикриновая кислота извлекает краситель, поэтому препараты следует сильно перекрашивать. Для обзорных целей достаточен и более простой метод, приведенный в 708.
По Ганзену, пикрофуксиновую окраску можно сочетать также с окраской ядер хромовоквасцовым кармином по Фигу (см. 637) или нафтазарином с хлористым алюминием (см. 738). Преимущество состоит в том, что на эти ядерные окраски пикриновая кислота не действует.
Чтобы повысить прочность окраски, делались различные попытки заменить пикриновую кислоту или кислотный фуксин другими, более устойчивыми красителями. Среди этих вариантов на первом месте стоит предложенная Домагком смесь пикриновой кислоты с тиазиновым красным (см. 710). По яркости окраски этот способ не уступает методу Ван-Гизона, но он настолько превосходит его по прочности, что в общем должен быть предпочтен оригинальному методу.
708. Окраска методом Ван-Гизона:
а) окрашивают ядра железным гематоксилином по Вейгерту (см. 677), 2 мин.;
б) основательно промывают в проточной воде 10 мин.;
в) обсушивают гладкой фильтровальной бумагой; капают пикрофуксин (100 см3 насыщенного водного раствора пикриновой кислоты с 5—10 см3 1-процентного водного раствора кислотного фуксина) на 1 мин.;
г) стряхивают краску и обсушивают гладкой фильтровальной бумагой;
д) 96-градусный спирт; абсолютный спирт; ксилол; бальзам.
Куртис заменяет кислотный фуксин пунцовым S, который в отличие от кислотного фуксина не выцветает. Недостаток этого заменителя состоит в том, что пунцовый S не столь специфично окрашивает молодую коллагеновую соединительную ткань (Карлетон, 1926).
Приготовление раствора: 1-процентного водного раствора пунцового S 10 см3, насыщенного водного раствора пикриновой кислоты 90 см3, 2-процентной уксусной кислоты 1—2 см3. Срок окраски 3—5 мин. Далее, как в 708.

709. Окраска железным гематоксилином—пикрофуксином по Ганзену:
а) окрашивают ядра железным триоксигематеином (см. 681), 3 мин.;
б) споласкивают дестиллированной водой, промывают в проточной воде, 10 мин.; дестиллированная вода;
в) помещают на 5 мин. в подкисленный пикрофуксин; на 60 см3 основного раствора (см. ниже) - емкость одного стаканчика для окраски — прибавить 7 капель (0,2—0,3 см3) 2-процентной уксусной кислоты;
г) погружают (на 2—4 сек., не дольше) в 60 см3 дестиллированной воды, к которой до этого прибавили 2,5 см3 подкисленного раствора пикрофуксина (внимание! чистая дестиллированная вода!);
д) быстро обсушивают гладкой фильтровальной бумагой, сложенной в 4—5 слоев, и помещают в 96-градусный спирт, где предметные стекла нужно несколько раз пошевелить. Через 1 мин. переносят на 1—2 мин. во второй стаканчик с 96-градусным спиртом;
е) абсолютный спирт (не меньше 2 стаканчиков), 3—5мин.; ксилол; бальзам.
Результат: ядра четко окрашены в черно-коричневый цвет, коллагеновая соединительная ткань, яркокрасная, гладкие и поперечнополосатые мышцы интенсивно желтые.
Отмывку излишней пикриновой кислоты в 96-процентном и абсолютном спиртах следует производить весьма тщательно, так как в противном случае окраска бледнеет уже через весьма короткий срок. Очень вредно действуют на окраску щелочи, так как они быстро разрушают кислотный фуксин. Вредной может оказаться и щелочь от плохого стекла (предметного, или покровного).
Приготовление основного раствора пикрофуксина: к 1000 см3 насыщенного на холоду раствора пикриновой кислоты прибавляют 50 см3 2-процентного водного раствора кислотного фуксина. Этот основной раствор может храниться неограниченно долго. Если нужно, чтобы красный цвет был особенно интенсивен, то количество прибавляемого кислотного фуксина увеличивают с 50 до 75 см3.

710. Окраска пикриновой кислотой—тиазиновым красным по Домагку (см. также 707 и 1509): а) окраска ядер железным гематоксилином Вейгерта, 2 мин.; б) основательная промывка в проточной воде, 10 мин.; в) окраска в пикриновой кислотетиазиновом красном, 3—5 мин.; г) ополаскивание в дестиллированной воде; д) две порции 96-градусного спирта; абсолютный спирт; ксилол; бальзам. Результат: ядра темнокоричневые, соединительная ткань яркокрасная, мышечная ткань желтая.
Приготовление раствора: к 100 см3 насыщенного водного раствора пикриновой кислоты прибавляют 7,5 см3 1-процентного водного раствора тиазинового красного.
Для сохранности и прозрачности препаратов важно, чтобы излишняя пикриновая кислота была хорошо отмыта 96-градусным спиртом. Этот метод можно сочетать с ядерной окраской хромовоквасцовым кармином (см. 637).

---
С уважением,
Dr. Andy

Обзорная окраска методом Ван-Гизона

СообщениеДобавлено: 25 фев 2010, 12:12
admin
1. Окрашивают железным гематоксилином Вейгерта 2-5 мин. (несколько капель красителя нанести на стекло).
2. Тщательно промыть в проточной воде не менее 10 мин., сменяя воду.
3. Высушить фильтровальной бумагой.
4. Капнуть на срез пикрофуксин на 1 мин (до 3 мин).
5. Стряхивают краску и высушивают фильтровальной бумагой (или быстро сполоснуть в дист. воде).
6. Очень быстро опустить в 96 спирт, абс. спирт, ксилол, бальзам.

Растворы:

1. Гематоксилин Вейгерта:
1) 1 г гематоксилина растворить в 100 мл 96 спирта
2) растворить 1,16 г хлорного железа в 102 мл воды, добавить 1,32 мл 33% соляной кислоты.
Хранить раздельно, перед употреблением смешать равные количества.

2. Пикрофуксин:
100 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты смешать с 5 -10 мл 1% раствора кислотного фуксина (100 мг до 10 мл).

Примечания:
1. После гематоксилина дифференцировка в 0,1% растворе соляной кислоты.
2. К методике (Волкова, с. 211):
1) к пункту 1: раствор железа приливают к раствору гематоксилина в немного меньшем количестве, затем приливают раствор железа к смеси по каплям, пока не начнут капли подниматься на стенку. Цвет смеси - темно-фиолетовый (цвет чернил).
2) к пункту 4: пикрофуксин должен быть цвета свежей крови.